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石碳酸復紅染色步驟，

微生物染色的注意事項：

1、 待檢菌菌齡應為18-24小時。一般情況下，革蘭氏陰性菌的染色反應較為穩定，不易受菌齡的長短影響；而革蘭氏陽性菌，有的在幼齡時呈陽性，超過24小時可變為陰性。故培養物越陳舊，菌細胞衰老、死亡，則染色常為陰性，造成錯判。

2、 涂片以勻薄為佳，切不可濃厚。過于密集的菌體，因洗脫不勻常呈假陽性。鏡檢革蘭氏染色反應時，要以分散開的細菌著色為準。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若經火焰固定時，應以不燙手為度，以免菌體受損，致使染色反應不準。

3、 革蘭染色操作的關鍵步驟是對脫色的掌握，脫色時間不足，革蘭氏陰性菌可染成陽性結果；脫色過度，革蘭氏陽性菌會染成陰性結果。故應注意掌握，以無紫色脫出時立即水洗。脫色時間應根據涂沫厚薄、涂片含水量多少適當掌握，涂沫厚、涂片含水少（水洗后瀝干水分）時，脫色時間稍長；涂沫薄、涂片含水量多（未瀝干）時，脫色時間稍短，在20-30秒內調整。

4、 碘液配制后，應裝在密閉的暗色瓶內儲存。如因儲存不當，部分碘將被揮發或被還原，碘液由原來的紅棕色變為淡黃色，以至影響固定結晶紫的作用，故不宜再用。

5、 革蘭氏染色能否獲得滿意的結果，與操作者的經驗有很大關系。操作沒有把握或對染液有懷疑時，應以對照菌同時染色。

微生物培養，是指借助人工配制的培養基和人為創造的培養條件（如培養溫度等），使某些（種）微生物快速生長繁殖。微生物培養可分為純培養和混合培養，前者是指對已純化的單一菌種進行培養和利用；后者是指對混合菌種或自然樣品（如土壤）中的微生物進行培養，然后根據培養基上所生長微生物的種類和數量，可在程度上估算土壤中微生物的多樣性與數量。微生物培養需要用到培養基，根據微生物的不同種類和生活習性來配制特定的培養基。微生物培養成功的關鍵在于無菌操作，如果培養器具和培養基不能滅菌、培養的過程中有雜菌污染是很容易失敗的。常用的微生物培養基可分為基礎培養基、分離培養基、運送保存增菌培養基、生化試驗培養基、藥物敏感試驗培養基、細菌L型培養基、真菌培養基、培養基、支原體衣原體和螺旋體培養基、病毒培養基等多種培養基。常用的培養基有LB培養基、SOB培養基、PDA培養基、沙保羅瓊脂培養基、營養瓊脂培養基、SM懸浮培養基、ADF培養基等。

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